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蛋白組學服務iTRAQ的4種同位素標記試劑由4種相對分子質量分別為114、115、116和117的報告基團(reportergroup),相對分子質量分別為31、30、29 和28 的質量平衡基團(balancegroup)以及一個相同的肽反應標記試劑基團(peptide reactivegroup)組成。不同的報告基團分別與相應的平衡基團相配后,相對分子質量均為145,即等量異位標簽(isobaric tag)。
將蛋白質裂解為肽段,然后用iTRAQ試劑進行差異標記。由于iTRAQ試劑是等量的,即不同同位素在標記同一多肽后在*級質譜檢測,分子量相同,用串聯質譜方法對在*級質譜檢測到前體離子(precursorion)進行碰撞誘導解離,產物離子通過第二級質譜進行分析。在二級質譜分析過程中,報告基團、質量平衡基團和多肽反應基團之間的鍵斷裂,質量平衡基團丟失,產生低質荷比(m/z)的報告離子。由于二級質譜可分析相對分子質量相差1的報告基團,不同報告基團離子強度的差異就代表了它所標記的多肽的相對豐度。同時,多肽內的酰胺鍵斷裂,形成一系列b離子和y 離子,得到離子片段的質量數,通過數據庫查詢和比較,可以鑒定出相應的蛋白質前體.

技術特點:
1.可同時標記2~8 個樣本。
2. iTRAQ技術不僅可發現胞漿蛋白,還有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。iTRAQ技術可檢測出低豐度蛋白、強堿性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。
3.可標記修飾后的氨基酸,因此對磷酸化蛋白等翻譯后修飾蛋白進行定性定量研究。
4.報告離子的相對分子質量較低(113~121),低分子量區是質譜定性(質量確定)和定量(豐度比較)較為準確的區域,因此質譜檢測更為靈敏可靠。

 

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